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人非小細胞肺癌細胞;A549 ,*

簡要描述:人非小細胞肺癌細胞;A549 ,*
該細胞系是1972年由GiardDJ通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系的,源自一位58歲的白人男性。A549能通過胞苷二磷脂酰膽堿途徑合成富含不飽和脂肪酸的卵磷脂;角蛋白陽性。

  • 產  地:上海
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2024-08-24
  • 訪  問  量:1237

詳細介紹

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人非小細胞肺癌細胞;A549 ,*
細胞介紹
該細胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系,患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。
 
細胞特性

  1. 來源:肺癌
  2. 形態(tài):上皮細胞樣
  3. 含量:>1x10個/mL
  4. 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
  5. 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

 
運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
 
細胞用途:僅供科研使用。
                      
人非小細胞肺癌細胞;A549 ,*培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

  1. 準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,GIBCO,貨號12800017,添加NaHCO3 1.5g/L)
  2. 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
  3. 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
    • 細胞處理:
  4. 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
  5. 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
  6.  

1.      棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.      加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.      按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.      將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
 
注意事項:
1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
 
 

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